Production et purification de protéine chez l’homme
CliniSciences propose des services spécialisés dans la production et la purification de protéines recombinantes à l’aide de cellules humaines HEK293, garantissant l’incorporation de modifications post-traductionnelles (PTM) authentiques essentielles à la fonctionnalité des protéines. Les cellules HEK293 sont reconnues pour leur capacité à réaliser des PTM complexes, telles que la glycosylation, la phosphorylation et le clivage protéolytique, souvent absents dans les systèmes procaryotes comme E. coli, ce qui les rend idéales pour produire des protéines biologiquement actives.
Principe
La lignée cellulaire humaine HEK293 offre un système d’expression mammalienne robuste capable de réaliser un large éventail de PTM essentielles pour le pliage correct, la stabilité et l’activité des protéines. Ces modifications, incluant glycosylation, phosphorylation et clivage protéolytique, sont cruciales pour la fonction biologique des protéines dans des applications in vitro et in vivo. Contrairement aux systèmes procaryotes, qui manquent de la machinerie cellulaire pour des PTM complexes, les cellules HEK293 imitent étroitement la physiologie humaine, produisant des protéines avec des modifications spécifiques à l’humain qui améliorent leur adéquation pour des applications thérapeutiques, diagnostiques et de recherche.
Les récentes avancées dans les méthodes de transfection transitoire, telles que les protocoles optimisés basés sur le PEI, ont encore amélioré l’efficacité de l’expression dans les cellules HEK293, permettant des rendements élevés et une évolutivité pour les applications biopharmaceutiques.
Composantes du Service
Notre service complet pour la production de protéines recombinantes dans les cellules HEK293 comprend :
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Synthèse de Gènes et Optimisation des Codons : Conception et synthèse du gène d’intérêt (GOI) avec optimisation des codons pour améliorer l’efficacité de la traduction et le rendement protéique dans les cellules HEK293.
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Clonage de Gènes et Construction de Vecteurs : Insertion du GOI dans un vecteur d’expression à haute efficacité, incorporant des étiquettes (par exemple, His-tag, Strep-tag) pour une purification et une détection simplifiées.
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Transfection Transitoire et Expression : Transfection des cellules HEK293 à l’aide de méthodes transitoires ou stables optimisées pour maximiser la synthèse protéique, avec une évolutivité pour une production à haut débit.
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Purification des Protéines : Récolte du surnageant de culture ou du lysat cellulaire, suivie d’une chromatographie d’affinité (par exemple, Ni-NTA, Strep-Tactin) et de chromatographies optionnelles de taille ou d’échange d’ions pour une pureté élevée.
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Contrôle Qualité et Caractérisation : Analyse de la pureté et de l’intégrité des protéines par SDS-PAGE et Western blot, avec une spectrométrie de masse optionnelle pour la détermination du poids moléculaire et la vérification des PTM.
Avantages
CliniSciences se distingue dans la production de protéines recombinantes par :
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Expertise dans les Systèmes HEK293 : Une spécialisation approfondie dans les lignées cellulaires humaines garantit des protéines avec des PTM spécifiques à l’humain, idéales pour les applications biopharmaceutiques.
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Solutions Complètes : Des services complets de la synthèse de gènes à la caractérisation des protéines, rationalisant le processus de production.
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Personnalisation et Flexibilité : Des solutions sur mesure, incluant le retrait d’étiquettes, la réduction d’endotoxines et une production évolutive pour répondre aux besoins spécifiques des projets.
Demandez une Proposition à notre équipe de support technique pour adapter nos services de production de proteins à vos besoins
Services Associés
En plus de la production de protéines basée sur HEK293, CliniSciences propose :